Nederlandaj esploristoj kombinas CRISPR kaj biolumineskon en eksperimenta testo porinfektaj malsanoj

Nove evoluinta nokta proteino povus akceli kaj simpligi la diagnozon de virusaj malsanoj, laŭ esploristoj en Nederlando.
Ilia studo, publikigita merkrede en ACS Publications, priskribas senteman, unupaŝan metodon por rapide analizi viralajn nukleajn acidojn kaj ilian aspekton uzante brilajn bluajn aŭ verdajn proteinojn.
La identigo de patogenoj per detektado de iliaj nukleaj acidaj fingrospuroj estas ŝlosila strategio en klinika diagnozo, biomedicina esplorado kaj manĝaĵo kaj media sekurecmonitorado.La vaste uzataj testoj de kvanta polimera ĉena reago (PCR) estas tre sentemaj, sed postulas sofistikan specimenan preparadon aŭ interpreton de rezultoj, igante ilin nepraktikaj por iuj sanaj agordoj aŭ rimedo-limigitaj agordoj.
Ĉi tiu grupo el Nederlando estas la rezulto de kunlaboro inter sciencistoj de universitatoj kaj hospitaloj por evoluigi rapidan, porteblan kaj facile uzeblan nuklean acidan diagnozan metodon, kiu povas esti aplikata en diversaj medioj.
Ili estis inspiritaj per fulgobriloj, fulgobriloj, kaj etaj steloj de akva fitoplanktono, ĉio funkciigita de fenomeno nomita bioluminesko.Ĉi tiu brila efiko estas kaŭzita de kemia reago implikanta la luciferazproteinon.La sciencistoj korpigis luciferazproteinojn en sensilojn kiuj elsendas lumon por faciligi observadon kiam ili trovas celon.Kvankam ĉi tio igas ĉi tiujn sensilojn idealaj por prizorga detekto, al ili nuntempe mankas la alta sentemo necesa por klinikaj diagnozaj testoj.Dum la CRISPR-gena redakta metodo povas disponigi ĉi tiun kapablon, ĝi postulas multajn paŝojn kaj kroman specialecan ekipaĵon por detekti la malfortan signalon kiu povas ĉeesti en kompleksaj, bruaj provaĵoj.
Esploristoj trovis manieron kombini CRISPR-rilatan proteinon kun biolumineska signalo kiu povas esti detektita per simpla cifereca fotilo.Por certigi, ke ekzistas sufiĉe da specimeno de RNA aŭ DNA por analizo, la esploristoj elfaris rekombinazan polimerazan plifortigon (RPA), simplan teknikon, kiu funkcias ĉe konstanta temperaturo de ĉirkaŭ 100 °F.Ili evoluigis novan platformon nomitan Luminescent Nucleic Acid Sensor (LUNAS), en kiu la du CRISPR/Cas9-proteinoj estas specifaj por malsamaj apudaj partoj de la virusgenaro, ĉiu kun unika luciferazfragmento alkroĉita al ili supre.
Kiam la specifa virusgenaro kiun la esploristoj ekzamenas ĉeestas, du CRISPR/Cas9-proteinoj ligas al la cela nukleacida sekvenco;ili iĝas en proksima proksimeco, permesante al nerompita luciferazproteino formiĝi kaj elsendi bluan lumon en la ĉeesto de kemia substrato..Por respondeci pri la substrato konsumita en ĉi tiu procezo, la esploristoj uzis kontrolreagon kiu elsendis verdan lumon.Tubo kiu ŝanĝas koloron de verda al blua indikas pozitivan rezulton.
La esploristoj testis sian platformon disvolvante la provon RPA-LUNAS, kiu detektasSARS-CoV-2 RNAsen teda RNA-izolado, kaj pruvis ĝian diagnozan agadon sur nazofaringaj swabprovaĵoj deCOVID-19pacientoj.RPA-LUNAS sukcese detektis SARS-CoV-2 ene de 20 minutoj en specimenoj kun RNA-virusa ŝarĝo tiel malalta kiel 200 kopioj/μL.
La esploristoj kredas, ke ilia provo povas facile kaj efike detekti multajn aliajn virusojn."RPA-LUNAS estas alloga por prizorgaj provoj de infektaj malsanoj," ili skribis.